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更新時(shí)間:2024-11-04
兔輸尿管上皮細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
尿道 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X8006 |
細(xì)胞簡介:
兔輸尿管上皮分離自輸尿管組織;輸尿管上接腎盂,下連膀胱,是一對細(xì)長的管道,呈扁圓柱狀,位于腹膜后,為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu),沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆。輸尿管有三個(gè)狹窄部:一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處(輸尿管起始處);一個(gè)在越過小骨盆入口處;最后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部。這些狹窄是結(jié)石及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu),即瓦耳代爾鞘,它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段,也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中,腹段自腎盂輸尿管交界處,到跨越髂動(dòng)脈處;盆段,自髂動(dòng)脈到膀胱壁;膀胱段,自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開口。輸尿管管壁分為4層,黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮,約有4-5層細(xì)胞;固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成,內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維;輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成;外膜為疏松結(jié)締組織,營養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中,輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔輸尿管上皮采用先消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層、最后膠原酶消化,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔輸尿管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔輸尿管上皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
乳鐵蛋白( Lactoferrin ) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
白血病抑制因子 (LIF) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
脂蛋脂酶 A2(LP-PLA2) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
脂肪細(xì)胞刺激因子 (LSP) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat androgen (androgen) ELISA Kit 大鼠雄激素(androgen)試劑盒
Humanβ2-Glycoprotein1AibodyIgG,β2-GP1AbIgGELISAKit 人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1AbIgG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCX3C-chemokinereceptor1,CX3CR1試劑盒人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織ERK1/2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit人孕同受體(PGR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
ADP核糖基化樣因子ARL3抗體
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員12抗體
CLMP重組人 ASAM / CLMP 蛋白 Protein
血管活性腸肽(VIP)重組蛋白 Recombinant Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
IL18R1 Protein Human 重組人 IL18R1 / CD218a 蛋白
Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725, His 標(biāo)簽)
血管活性腸肽(VIP)重組蛋白 Recombinant Vasoactive Intestinal Peptide (VIP)
IL18R1 Protein Human 重組人 IL18R1 / CD218a 蛋白
CLMP重組人 ASAM / CLMP 蛋白 Protein
Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725, His 標(biāo)簽)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
兔輸尿管上皮細(xì)胞大鼠間隙連接蛋白43(CX43)試劑盒 ,英文名: CX43 ELISA Kit
Inu Susuke factor II (HC II) ELISA Kit 犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)試劑盒
RatAi-ypsin,ATELISAKit 大鼠抗(AT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforFFAELISAKit大鼠游離脂肪酸
細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)
RatOrexinAELISAKit大鼠阿立新A(OrexinA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
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