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更新時(shí)間:2024-10-27
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
肺組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7008 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠Ⅱ型肺泡上皮分離自肺組織;肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無(wú)數(shù)細(xì)支氣管,它們的末端膨大成囊,囊的四周有很多突出的小囊泡,即為肺泡。小肺泡細(xì)胞,又稱I型肺泡細(xì)胞,厚約0.1微米,基底部是基底膜,無(wú)增殖能力。大肺泡細(xì)胞,又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞,分泌表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰),以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間,數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多,但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細(xì)胞核圓形,胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀。電鏡下,細(xì)胞游離而有少量微絨毛,胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體,有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有較多的分泌顆粒,電子密度高、大小不等,直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu),稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂,以二棕櫚酰為主,此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)后,在肺泡表面形成一層粘液層,稱為表面活性物質(zhì)(surfactant)。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小,表面活性物質(zhì)密度增加,表面張力降低,防止肺泡過(guò)度塌陷;吸氣時(shí)肺泡擴(kuò)張,表面活性物質(zhì)密度減小,肺泡回縮力加大,可防止肺泡過(guò)度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張,過(guò)度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏;吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能,故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮采用彈性蛋白酶灌注消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國(guó) Phoenix
小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國(guó) Phoenix
mouse CD 40L ELISA Kit 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 奧地利 Bender
大鼠 C 反應(yīng)蛋白 (rat CRP) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國(guó) ADI
小鼠仙臺(tái)病毒(Sendai)檢測(cè)試劑盒 96T/48T
Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測(cè)試劑盒
Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Chickenheparansulfate,HS檢測(cè)試劑盒雞類肝素(HS)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
新型抑癌基因抗體
NF-kappa-B抑制子beta抗體
CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein
1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)
RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)
1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)
CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein
IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)
RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒
Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測(cè)試劑盒
Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H
溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升
Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
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