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日期:2021-10-20瀏覽:911次
轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
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三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體
ADCK1蛋白抗體
酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體
α/β水解酶4抗體
ADCK2蛋白抗體
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乙醇脫氫酶1抗體
δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體
肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體
α2巨球蛋白(α-2M)抗體
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系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體
磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體
接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體